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    蛋白质双向电泳常用溶液配方

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    服务概述

       本文介绍了蛋白质双向电泳实验中常用的溶液配方，包括水化/上样缓冲液、溴酚蓝储液、胶条平衡液贮存液、10%(v/v)SDS溶液、4x分离胶溶液、聚丙烯酰胺单体贮存液、10%过硫酸铵、电泳缓冲液、琼脂糖封胶液等9种溶液配方，现与大家分享，欢迎收藏

    A.水化/上样缓冲液(rehydration/sample lysis buffer)

    水化/上样缓冲液（I） 1ml

    urea 8M 0.48g
    CHAPS 4% 40mg
    DTT 50~65mM 7~9.8mg
    or TBP 2mM 10µl
    40% Bio-Lyte 0.2%(w/v) 5µl
    1%溴酚蓝 0.001% 1µl
    MilliQ水   650µl

    水化上样缓冲液（II）1ml

    urea 7M 0.42g
    thiurea 2M 0.152g
    CHAPS 4% 40mg
    DTT 50~65mM 7~9.8mg
    or TBP 2mM 10µl
    40% Bio-Lyte 0.2%(w/v) 5µl
    1%溴酚蓝 0.001% 1µl
    MilliQ水   650µl

      1. 水化上样缓冲液（I）中的尿素浓度可以调高到9或者9.8M；用7M Urea和2M Thoiurea溶解蛋白的能力较单用尿素强。

      2. 现在常用的去垢剂为CHAPS，也可用Triton X-100、NP-40等代替。

      3. 可以加蛋白质酶的抑制剂和/核酸酶。

      4. 还原剂可用DTT或TBP，分离碱性蛋白时最好用TBP。

      5. 5溴酚蓝作为指示剂，可以监测上样和聚焦过程，如操作熟练，可以不加。

    B．溴酚蓝储液

      Final concentration Amount
    Bromophenol blue 1% 10mg
    Tris-base 50mM 6mg
    MilliQ H2O   to 1ml

    C.胶条平衡液贮存液（SDS equlibration buffer）

    (50mM Tris-cl pH8.8, 6M Urea, 30% glycerol, 2% SDS, bromophenol blue, 200ml)

      Final concentration Amount
    1.5M Tris-cl,pH8.8 50mM 6.7ml
    Urea (Fw 60.06) 6M 72.07g
    Glycerol(87% v/v) 30%(v/v) 69ml
    SDS(Fw 288.38) 2%(w/v) 4.0g
    1%Bromophenol blue solution 0.002%(w/v) 400μl
        To 200ml

    分装后贮存于-20℃；溴酚蓝可以不加；

    用之前在加DTT(20mg/ml)或者碘乙酰胺(25mg/ml)

    D.10%(v/v)SDS溶液

    SDS(Fw 288.38)      10.0g

    MilliQ H2O      To100ml

    用0.45微米的滤纸过滤室温保存(高纯试剂一般不用过滤)

    E.聚丙烯酰胺单体贮存液（Monomer stock solution）

      Final concentration Amount
    Acrylamide 30% 150g
    N,N’-methylenebisacrylamide
    or PDA    		 0.8% 4.0g
    5.0g
    MilliQ H2O   To 500ml

    用0.45微米的滤纸过滤(可不过滤), 4℃避光保存

    F.4x分离胶溶液(4x Resolving gel buffer, 1.5M Tris-Cl pH8.8)

      Final concentration Amount
    Tris-base(Fw 121.1)
    MilliQ H2O
    HCl(Fw 36.46)    		 1.5M 181.5g
    750ml
    Adjust to pH8.8
    MilliQ H2O   To 500ml

    用0.45微米的滤纸过滤，4℃保存

    G.10%过硫酸铵

      Final concentration Amount
    Ammonium persulphate(APS)
    MilliQ H2O    		 10% 1g
    To 10ml

    当加入水时，新鲜的过硫酸铵会发出“咔嚓”声音。如果没有声音，则需要换新的药品。可少量(10ml)配制，分装后4℃保存。

    H.电泳缓冲液（TGS electophoresis buffer）

    (25mM Tris,192 mM glycine, 0.1%SDS)

    Final concentration   Amount
    Tris base 25 mM 15.1g    7.55g
    Glycine 192mM 72.1g    36.05g
    SDS 0.1%(w/v) 5.0g    2.5g
    MilliQ H2O   To 5000ml
    To 2500ml

    该溶液的pH值不需调整，可直接在大试剂瓶中配制溶液，室温保存。

    I.琼脂糖封胶液（Agrose sealing solution）

      Final concentration Amount
    TGS electophoresis buffer
    Agrose (NA or M)
    1% Bromophenol blue    		 ---
    0.5%
    0.002%(w/v)    		 50ml
    0.25g
    100μl

    可在锥形瓶配制，微波炉加热熔化。小份分装，室温保存。

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